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熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用(1)

日期: 2017-07-24
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案例名稱: 熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用(1)

摘要:?維生素B2又名核黃素,在食品中以游離形式或磷酸酯等結合形式存在。膳食中的主要來源是各種動物性食品,其次是植物性食品的豆類和新鮮綠葉蔬菜。檢測其含量也有著許多的方法,其中熒光分光光度法是對熒光物質進行定性和定量的有效方法,它是維生素B2含量測定的一個比較常用的方法。

本文以測定多維片中維生素B2(核黃素)元素含量為例,依據GB/T 5009.85-2003《食品中核黃素(維生素B2)的測定》,應用港東F-380型熒光分光光度計對多維片中維生素B2含量進行測定。結果證明此方法操作簡便,線性良好是測定多維片中維生素B2含量的理想方法。



關鍵詞:熒光分光光度法 ?維生素B2核黃素 ?多維片


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· 原理

核黃素在 440nm~500nm 波長光照射下發生黃綠色熒光。在稀溶液中其熒光強度與核黃素的濃度成正比。在波長 525nm 下測定其熒光強度。試液再加入低亞硫酸鈉(Na 2 S 2 O 4 ),將核黃素還原為無熒光的物質,然后再測定試液中殘余熒光雜質的熒光強度,兩者之差即為多維片中核黃素所產生的熒光強度。

? ?

·?實驗條件

1、儀器及附件:

天津港東 F-380 型熒光分光光度計

熒光石英比色皿

?

2、分析條件:?

? ? 激發波長:440nm

? ??發射波長:525nm

?

3、藥品:

? ??硅鎂吸附劑(60~100 目)、乙酸鈉、木瓜蛋白酶、淀粉酶、鹽酸、氫氧化鈉、低亞

? ??硫酸鈉(Na 2 S 2 O 4 )、洗脫液(丙酮、冰乙酸、水)、高錳酸鉀、過氧化氫、核黃素標準溶液(純度 98%)等。

?

4、其他:

電熱恒溫培養箱、高壓消毒鍋、分析天平(0.0001g)、容量瓶、鹽基交換柱、三角瓶、瓷坩堝、移液管、刻度試管、具塞比色管、試管架、擦鏡紙、滴管、量筒、磁力攪拌器、pH 計等。


?

·?樣品及標準樣品處理

? ? 特別注意:整個操作過程需避光進行

1、樣品溶液的制備

(1)樣品提取

? ? ① 水解

熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用


? ???② 酶解

熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用

? ??③ 過濾

熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用


(2)氧化去雜質

熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用

(3)核黃素的吸附和洗脫

熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用

2、標準溶液的制備

(1)核黃素標準儲備液(25μg/mL):

? ? 將標準品核黃素粉狀結晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。經過 24 小時后,

? ??準確稱取精確稱取 50mg,置于 2L 容量瓶中,加入 2.4mL 冰乙酸和 1.5L 水。將容量瓶置

? ??于溫水中搖動,待其溶解,冷至室溫,稀釋至 2L,移至棕色瓶內,加少許甲苯蓋于溶液表面,于冰箱中避光保存。

?

(2)核黃素標準使用液(1μg/mL)

吸取 2.00mL 核黃素標準儲備液(25μg/mL),置于 50mL 棕色容量瓶中,用水稀釋至

刻度。避光,貯存于 4℃冰箱,可保存一周。


3、空白溶液

待測試樣及標準的熒光值測量后,在各管的剩余液(約 5~7mL)中加入 0.1mL20%的低亞硫酸鈉溶液(Na 2 S 2 O 4 ),立即混勻,在 20s 內測出各管的熒光值,作為各自的空白值。


·?測定結果

應用港東 F-380 型熒光分光光度計的“波長掃描”模塊,分別讀取待測溶液熒光強度,根據計算公式得到樣品維生素B 2 的含量。


熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用

熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應用

·?測定結果

應用港東 F-380 型熒光分光光度計的“光度測定”模塊,分別讀取待測溶液的熒光強度,根據計算公式得到樣品維生素B2的含量。

?

·?結論

采用熒光分光光度法測定多維片中維生素B2含量,操作簡單,方法準確,是一種理想的方法。

由于維生素B2待測液遇光不穩定,因此實驗對儀器的功能要求高。港東 F-380 型熒光分光光度計率先在硬件上采用了激發側擋光快門的設置,從而避免了樣品被強光的直接照射,使整個實驗操作簡便,結果重現性良好。



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